Charakterizace a čistota proteinů

Na základě ICH-Q6B regulí je doporučeno proteiny a peptidy charakterizovat podle jejich vzhledu, molekulové hmotnosti, izoelektrického bodu, pH v roztoku, obsahu aminokyselin, primární struktury a polohy disulfidových můstků.Analýza čistoty je velice důležitou součástí komplexní charakterizace aktivních složek na proteinové nebo peptidové bázi. Nadlimitní přítomnost proteinových agregátů, zbytkových nukleových kyselin nebo bakteriálních endotoxinů totiž může v lidském organismu vyvolat nežádoucí a potenciálně životu nebezpečnou imunitní reakci.

Imunochemické vlastnosti

Zhodnocení imunochemických vlastností daného proteinového léčiva se stává nutností, zvláště pokud toto léčivo spadá do kategorie protilátek. V takových případech je vyžadována charakterizace afinity léčiva ke specifickým antigenům nebo jejich dobře definovaným částem. Další nedílnou součástí této charakterizace je testování imunitní odezvy a míry tvorby ADA (anti-drug antibodies).

Heterogenita

Aminokyseliny mohou být poměrně snadno chemicky modifikovány, díky tomu pak proteiny často obsahují řadu post-translačních modifikací (PTMs). Tyto modifikace obvykle nelze predikovat ze sekvence kódujícího genu, ale jelikož mají zásadní vliv na celkovou funkci proteinu, jejich popsání je nedílnou součástí komplexní charakterizace biologických léčiv.

Proteomické služby

Nabízíme identifikaci proteinů a peptidů ve směsích (např. rostlinné a živočišné extrakty, vícesložkové biofarmaceutické preparáty) pomocí 2D LC-MS/MS.

Kvantifikace v biologické materiálu

Kromě základní charakterizace peptidových a proteinových léčiv provádíme i stanovení těchto látek v biologickém materiálu metodami LC-MS a ELISA v režimech správné laboratorní a klinické praxe. Naše laboratoř je vybavena systémy UPLC, LC-FTMS, ELISA (UV-VIS, fluorescence, elektrochemiluminiscence), kapilární elektroforéza, gelová elektroforéza, isoelektrické fokusování a systémem pro automatickou analýzu aminokyselin.

Vazba na plazmatické bílkoviny

Pro vývoj léčiv je zásadní stanovit a znát stupeň vazby malých molekul na bílkoviny, protože to přímo ovlivňuje rychlost vylučování přípravku, v některých případech to může být až 95 – 99%, a naopak to určuje celkovou účinnost léčiv.

QUINTA-ANALYTICA používá ke stanovení této vazby kombinaci ekvilibrační dialýzy a LC-MS/MS.

Zařízení má dvě komůrky spojené membránou s póry, které propouští pouze molekuly do určité velikosti. Do jedné komůrky je pipetován vzorek plasmy nebo proteinu (nejčastěji albumin) s analytem, do druhé komůrky pak pouze pufr. Po ustálení rovnováhy je díky volnému pohybu malé molekuly přes membránu její koncentrace v obou komorách stejná a odpovídá množství látky na protein nenavázané.